真菌孢子你还在自己数吗？——一种自动检测新方案

目前，对丝状真菌的计数主要是计其孢子数。通过孢子数的测定，可以对比不同培养条件下菌株的生长状况，优化出更优的培养基组分、温度、PH等。此外，孢子计数还是研究其萌发率的基础。

而实验室常用的计数真菌孢子数量的方法是血球计数法和平板菌落计数法，其过程费时费力，且不同人员间操作误差大。JIMBIO CC 新型细胞计数仪的出现可替代此类方法，提高计数效率，给出准确客观的计数结果。

1. 材料与方法

1.1 材料

菌种：新月弯孢霉（Curvularia lunata）

培养基 ：马铃薯 200 g；蔗糖 20 g；琼脂 20 g；水 1000 ml。

1.2 孢子悬液的制备：

1.2.1 在50ml离心管中加入5ml左右含0.05%吐温80的生理盐水。

1.2.2 用枪头将固体培养基上的孢子刮下。

1.2.3 剧烈震荡后，用八层纱布过滤两次至15ml离心管中（中间用5ml 含

0.05%吐温80的生理盐水洗一次)。

1.2.4可接到小的EP管计数，孢子很容易吸附管壁，看着吹打匀。

2. 结果与分析

图1.  新月弯孢霉孢子悬液计数

表1 计数仪计数结果与血球计数板对比

从上述图表中可看出，计数仪测得颗粒平均直径10 μm左右，且集中度高，与实际孢子粒径相当。与计数板结果比对中，从0.5*10^6至2.0*10^6的浓度梯度中，计数仪技术结果与血球计数板结果相当，且数值波动较小。

因为会有少量的细小菌丝或碎片残留（如在5 μm处），但较之整个计数结果占比很小，可以忽略不计或人工选区修正。

该计数可帮助准确控制接种量，如要计算孢子萌发率的话，只需待孢子萌发后，再进行一次过滤（需将纱布上的残留孢子洗下），将剩余孢子计数，便可计算萌发率。

本文章转自检验医学网